Gizzard Erosion and Ulceration Syndrome in Moroccan Poultry Flocks and Molecular Characterization of Fowl Adenoviruses (FAdV).

Gizzard erosion and ulceration syndrome (GEUS) is caused by a fowl adenovirus serotype 1 (FAdV-1) and was first reported in laying hens in Japan in 1993. This syndrome has emerged as an epizootic in Morocco since 2014, causing significant economic losses for the poultry industry, but no involvement of a FAdV has been confirmed. Thus, the objective of this work was to assess GEUS cases that occurred in the country and to determine the role of FAdVs in their occurrence. Investigations were based on a retrospective reassessment of tissue sections and paraffin blocks of gizzards and livers from GEUS cases between 2014 and 2021 coupled with a prospective search of cases in 2022. Gizzards and livers were fixed in 10% neutral buffered formalin for histopathologic examinations according to standard methods and stored at -20 C for molecular analysis. After deparaffinizing, 10-µm-thick tissue sections along with fresh organs were subjected to DNA extraction using a commercial kit. A primer pair specific for the Hexon gene of FAdVs was used in conventional PCR; in contrast, for real-time PCR, a primer pair targeting the 52K gene was employed. In total, 24 flock cases with characteristic GEUS were assessed between 2014 and 2022. They were nine broiler cases aged between 11 and 39 days, 11 layer cases with an age between 17 and 29 wk, two cases in meat-type breeders aged 10 and 27 wk, and two flock cases of turkey poults aged 22 and 23 days. In most cases, microscopic lesions were consistent with an ulcerative and lymphoplasmocytic ventriculitis, and pathognomonic viral intranuclear inclusion bodies within degenerate epithelial cells were identified in four broiler flock cases, four layer cases, and one case in breeders and hence were highly suggestive of a FAdV infection. Among these nine cases that were positive at the histopathologic examination, six cases were found to be FAdV-PCR positive; another four cases were negative to histology but FAdV-PCR positive. Furthermore, a sequencing analysis was conducted, providing the initial evidence of the implication of FAdV-1 from species A as the cause of GEUS in Moroccan poultry. Additionally, a phylogenetic analysis was executed to facilitate a comparison between the strains investigated in this study and those identified in diverse geographic regions and across various time periods. Síndrome de erosión y ulceración de la molleja en parvadas avícolas marroquíes y caracterización molecular de los adenovirus aviares (FAdV). El síndrome de erosión y ulceración de la molleja (GEUS) es causado por un adenovirus del pollo de serotipo 1 (FAdV-1) y se reportó por primera vez en gallinas de postura en Japón en 1993. Este síndrome se ha convertido en una epizootia en Marruecos desde 2014, causando importantes pérdidas económicas a la industria avícola, pero no se ha confirmado la participación de ningún adenovirus del pollo. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue evaluar los casos de GEUS ocurridos en el país y determinar el papel de adenovirus del pollo en su presentación. Las investigaciones se basaron en una reevaluación retrospectiva de secciones de tejido y bloques de parafina de mollejas e hígados de casos de GEUS entre 2014 y 2021, junto con una investigación prospectiva de casos en el año 2022. Las mollejas y los hígados se fijaron en formalina al 10% amortiguada y neutra para exámenes histopatológicos de acuerdo con métodos estándar y se almacenaron a -20 C para análisis moleculares. Después de la desparafinación, las secciones de tejido de 10 µm de espesor junto con órganos frescos se sometieron a extracción de ADN utilizando un estuche comercial. Para realizar un método de PCR convencional, se utilizó un par de iniciadores específicos para el gene de hexon de los adenovirus del pollo, mientras que, para el método de PCR en tiempo real, se empleó un par de iniciadores dirigidos al gene 52K. En total, se evaluaron 24 casos de parvadas con la presentación característica del síndrome de erosión y ulceración de la molleja entre los años 2014 y 2022. Se trató de nueve casos de pollos de engorde con edades comprendidas entre los 11 y 39 días, 11 casos de ponedoras con una edad de entre 17 y 29 semanas, dos casos en reproductoras pesadas de 10 y 27 semanas, y dos lotes de pavitos de 22 y 23 días. En la mayoría de los casos, las lesiones microscópicas fueron consistentes con una ventriculitis ulcerativa y linfoplasmocítica, y se identificaron cuerpos de inclusión intranucleares virales patognomónicos dentro de células epiteliales degeneradas en cuatro casos de parvadas de pollos de engorde, cuatro casos de ponedoras y un caso en reproductoras y por lo tanto, fueron altamente sugestivos de la infección por adenovirus de pollo. Entre los nueve casos que fueron positivos en el examen histopatológico, se encontró que seis casos fueron positivos para adenovirus de pollo mediante PCR; otros cuatro casos fueron negativos a la histología pero positivos a la presencia de adenovirus del pollo mediante PCR. Además, se realizó un análisis de secuenciación que proporcionó la evidencia inicial del papel de adenovirus del pollo especie A como causante del síndrome de erosión y ulceración de la molleja en la avicultura de Marruecos. Además, se realizó un análisis filogenético para facilitar una comparación entre las cepas investigadas en este estudio y las identificadas en diversas regiones geográficas y en varios períodos de tiempo.